Варианты и правила определения билирубина в сыворотке крови

Определение билирубина в сыворотке крови нужно при подозрении на вирусный гепатит, желтухе новорожденного или связанной с разрушением эритроцитов, циррозом печени, опухолью, закупоркой желчных путей камнем. Анализ используется и для контроля за лечением. Проводится несколькими методами, самые распространенные – это химические по Бакальчуку, Ван ден Бергу, Йендрашеку.

К сыворотке крови добавляют реактивы, которые вступают в прямую реакцию или после обработки пробы спиртом (непрямая часть). Результаты измерений по Йендрашеку в норме: общий билирубин 4-21 мкмоль/л, свободный 6-15 и связанный 2-5 единиц. Для проведения анализа достаточно 1 дня, при необходимости можно определить содержание пигмента мгновенно методом двух волн в анализаторе (например, Билимет М).

Когда важно определение билирубина в сыворотке крови

Определение билирубина в сыворотке крови используется для:

• исследования работы печени;
• постановки диагноза – гепатит на ранней стадии, цирроз, жировое перерождение, алкогольная болезнь печеночной ткани, раковая опухоль печени или метастазы, врожденные нарушения обмена билирубина;
• выявления ускоренного разрушения эритроцитов при гемолитической анемии (врожденные, аутоиммунные или токсические, после переливания крови);
• дифференциальной диагностики (отличия) физиологической (естественной) желтухи новорожденного от опасной ядерной энцефалопатии (избыток билирубина откладывается в ядрах головного мозга);
• выяснения степени закупорки желчных путей при наличии камня, опухоли или воспаления с нарушением оттока желчи;
• контроля за лечением болезней печени, крови и желчевыводящей системы;
• оценки повреждающего действия медикаментов.

Симптомы, при которых нужно пройти анализ:

• пожелтение кожи;
• упорный зуд кожных покровов;
• потемнение мочи;
• слабость и утомляемость, ломота в костях, суставах в сочетании с болью, тяжестью в правом подреберье.

Рекомендуем прочитать о том, как меняется билирубин при гепатите. Из статьи вы узнаете о показателях билирубина при разных видах гепатита, в чем опасность высокого уровня билирубина при гепатите, что поможет привести показатель к норме.

А здесь подробнее о том, как правильно сдавать кровь на билирубин.

Диагностическое значение показателя

Показатель билирубина имеет диагностическое значение при:

• ускоренном гемолизе (разрушении эритроцитов) на фоне анемии, малярии, заражении крови (сепсис);
• повреждении печени вирусом, алкоголем, ядом – гепатите;
• гнойнике в печеночной ткани (абсцесс);
• замещении разрушенной ткани рубцовыми волокнами – цирроз;
• опухолевом процессе в печени (первичный рак) или метастазировании из других органов;
• подпеченочной закупорке желчных путей – желчнокаменная болезнь, опухоль поджелудочной железы или панкреатит, холангит, холецистит.

Все эти болезни протекают с повышением общего билирубина, но его фракции (прямая и непрямая часть) растут в разной степени. Поэтому исследование помогает отличить вид желтухи:

• надпеченочная (гемолитическая),
• внутрипеченочная (паренхиматозная),
• подпеченочная (механическая).

Снижение билирубина имеет низкое диагностическое значение и встречается при нарушении правил проведения анализа (употребление алкоголя, кофе, снотворных, антибиотиков, гормонов, противосудорожных). Причиной низких показателей бывает и нахождение в светлом месте сыворотки из венозной крови.

Методы определения билирубина в сыворотке крови

Одного рекомендованного метода (референсного) для определения билирубина в сыворотке крови нет, в разных лабораториях могут использовать такие способы:

• высокоэффективная жидкостная хроматография – части сыворотки разделяют в приборе на части, помогает сразу выделить свободный и связанный билирубин;
• электрохимический (например, полярография) – есть возможность очень точно определить пигмент, свободный от белка (опасный, несвязанный);
• окислительный – при добавлении йода, азотной кислоты, хлорида железа происходит окисление билирубина, потом по его степени оценивают концентрацию, отличаются низкой чувствительностью;
• сухая химия – в анализаторах находится многослойная пленка, а уровень пигмента определяют по отражению световых волн, что не требует добавления реактивов, дорогостоящее исследование;
• ферментативный – применяется фермент билирубиноксидаза, который ускоряет превращение билирубина в биливердин, особенностью анализа является возможность сделать при гемолизе пробы (кровь с разрушением эритроцитов);
• химический – самые распространенный, к образцу сыворотки крови добавляют разные реактивы (кофеин, димексид и другие), их отличает сравнительная дешевизна, при болезнях крови и почек возможны неточные результаты, трудоемкие, так как исследование имеет много этапов

Количественное определение билирубина в сыворотке крови

В лабораториях количественное определение билирубина в сыворотке крови чаще всего проводят по методам Бакальчука, Ван ден Берга и Йендрашека.

По Бакальчуку

После добавления сульфаниловой кислоты билирубин окрашивает раствор в розово-фиолетовый цвет. При этом связанный (прямой) билирубин дает окрашивание сразу (прямая реакция), а непрямой (несвязанный) только после добавления спирта. Из-за таких особенностей фракции билирубина и имеют соответствующие названия:

• непрямой, несвязанный – токсичный для организма, растворим в жирах;
• прямой, связанный с глюкуроновой кислотой – обезвреженный в печени, растворяется в воде и выводится с мочой.

Уровень билирубина получают сразу после помещения пробирки в аппарат для фотометрии.

По Ван ден Бергу

Принцип определения желчного пигмента по Ван ден Бергу предусматривает такие же реакции, что и по Бакальчуку. Отличие состоит в том, что заранее готовят девять пробирок, используемых в качестве образцов. Полученную окраску пробы визуально сравнивают с цветовым рядом и выбирают наиболее соответствующую.

По методу Йендрашика

Особенность методики состоит в добавлении раствора кофеина для ускорения реакции. Измерение проводят по степени окрашивания раствора в аппарате для фотоколориметрии. Нормой для билирубина считают показатели в мкмоль/л:

• общий 4-21,
• свободный 6-15,
• связанный 2-5.

Смотрите в этом видео об особенностях проведения анализа крови на билирубин, расшифровке результатов:

Методы двух волн

Метод двух волн положен в основу для экспресс-анализа крови, то есть используется при необходимости срочно измерить содержание билирубина в сыворотке. Чаще всего это нужно при нарастающей желтухе новорожденных. При таком способе можно определить только общий уровень желчного пигмента. Так как основная часть у ребенка (около 90%) представлена свободной фракцией, то для понимания тактики дальнейшего лечения этого анализа достаточно.

Суть состоит в облучении плазмы крови, полученной из пятки, волнами с разной длиной, гемоглобин поглощает обе, а билирубин только одну. Эту разницу и берут за основу вычислений. Для измерения тонкую пробирку (капилляр) помещают в билирубинометр и нажимают кнопку. Все остальные действия выполняются автоматически и практически мгновенно. Итоговое значение высвечивается на электронном табло.

Определение общего билирубина в сыворотке крови: подготовка, что влияет на результат

Определение уровня общего билирубина в сыворотке крови (как и его фракций) относится к очень чувствительным исследованиям, при нарушении правил подготовки и проведения получают недостоверный результат.

Подготовка

Важно придерживаться таких рекомендаций:

• за 5 дней уточнить у лечащею врача возможность применения медикаментов;
• за 2 дня нельзя принимать алкоголь и напитки с кофеином, переедать, начинать диету;
• за сутки не разрешена интенсивная физическая нагрузка и стрессовые перенапряжения;
• накануне ужин должен быть легким и не позже, чем за 8-10 часов до взятия крови;
• утром в день исследования можно только пить воду, за 2 часа нельзя курить, за 30 минут избегают волнений и активных движений.

Процедура забора крови

Для сдачи материала для анализа нужно прийти в процедурный кабинет утром (до 11 часов), так как на протяжении дня уровень билирубина меняется. При взятии крови нельзя туго затягивать жгут и активно работать кулаком.

Хранение и транспортировка

Венозная кровь хранится в темном месте при температуре 2-8 градусов не более 8 часов. Ее перевозят в стерильных контейнерах, при транспортировке нельзя допускать сильного встряхивания пробирок.

Из-за повышенных требований к соблюдению правил выполнения анализа лучше всего выбрать лабораторию с хорошей репутацией. Если нужно несколько раз проходить исследование, то рекомендуется это делать в одном и том же учреждении, так как при разных вариантах определения желчного пигмента норма может отличаться.

Меры предосторожности при исследовании

Перед проведением теста все растворы, которые используются для определения общего билирубина в крови, должны быть подогреты до температуры 37 градусов. На протяжении всего периода исследования необходимо поддерживать стабильный температурный режим.

Что может изменить результат

При определении билирубина в крови следует избегать факторов, влияющих на результат анализа:

• употребление алкоголя, кофе, жирной пищи;
• прием успокаивающих и снотворных средств, антидепрессантов;
• применение Парацетамола и других нестероидных противовоспалительных средств;
• введение антибиотиков цефалоспоринового ряда (например, Цефтриаксон).

Рекомендуем прочитать о том, как проводится анализ на билирубин у новорожденных. Из статьи вы узнаете, как берут анализ крови на билирубин, причинах отклонения от нормы в крови у младенцев, как привести билирубин к норме.

А здесь подробнее о том, что собой представляет прибор для измерения билирубина у новорожденных.

Определение билирубина в крови проводят разными способами, наиболее распространенный – это химический с добавлением реактивов. На достоверность результатов влияет питание, прием медикаментов, стрессовые и физические перегрузки.